5 replies to this topic

[pygo]

Hi guys,

Anyone know how to detect and quantify protein in western blot using method other than HRP-antibody? My lab is in tight budget and we are looking for cheaper alternative.  Thanx heaps!  

Sissle

[jadefalcon]

you can use alkaline-phosphatase (AP) coupled antibodies, but I'm not sure if this is cheaper than HRP, taken together the cost for the Ab and the substrate....

mike

[margo33]

Je suis pas sûre que ça convienne mais c'est vraiment le moins coûteux: tu peux faire 1 coloration au rouge Ponceau ou ou bleu de Coomassie et regarder si tu as 1 bande à la taille que tu attends! Ensuite, si ce prétest est positif tu utilise les anticorps (moi aussi je prends des coumplés à la Phosphatase alcaline) pour confirmer la nature de ta protéine. Tu ne les utilises pas pour rien au moins. Bonne chance!

[jadefalcon]

Quote

  Je suis pas sûre que ça convienne mais c'est vraiment le moins coûteux: tu peux faire 1 coloration au rouge Ponceau ou ou bleu de Coomassie et regarder si tu as 1 bande à la taille que tu attends! Ensuite, si ce prétest est positif tu utilise les anticorps (moi aussi je prends des coumplés à la Phosphatase alcaline) pour confirmer la nature de ta protéine. Tu ne les utilises pas pour rien au moins. Bonne chance!

Errr, my french is a little bit rusty (i.e. plus mal), and there wasn't much french to begin with, so maybe people here can understand this way better than me, so corrections welcome!

I think margo33 says, you can stain your membrane with coommassie or ponceau and then use comparing methods to determine your protein-concentrations, besides she would use AP-antibodies, too, and wishes you luck!

(I hope this is halfway correct )

mike

Edited by jadefalcon, 03 March 2005 - 04:49 AM.

[margo33]

I wanted to say: you can stain your membrane with coommassie or ponceau and look if you've got a band at the size you 're waiting for. Then you can use AP-antibodies to confirm it's the right protein. So you don't waste your antibody for nothing!
Sorry for the answer in french!

[jadefalcon]

@margo:

I'd say: "swing and a miss", but a close one, sorry!

mike